C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-），即LTK-，源自L-929的胸苷激酶缺陷亞系。成纖維樣貼壁生長(zhǎng)，因TK缺陷不能在HAT培養(yǎng)基中存活。常用于基因轉(zhuǎn)染及生化研究。

Name: C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）
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C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）

C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞（L929-TK-）核心產(chǎn)品為從C3H/An小鼠結(jié)締組織中分離、永生化并通過(guò)基因編輯敲除TK基因構(gòu)建的穩(wěn)定細(xì)胞株，可提供不同傳代次數(shù)的細(xì)胞系，配套提供細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)、細(xì)胞凍存液、復(fù)蘇液及質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告（含細(xì)胞純度、TK基因缺失驗(yàn)證、支原體檢測(cè)、成纖維細(xì)胞標(biāo)志物鑒定等），同時(shí)提供細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)支持及定制化實(shí)驗(yàn)服務(wù)。該細(xì)胞采用yi蛋白酶消化、差速貼壁等成熟分離技術(shù)，從C3H/An小鼠結(jié)締組織中去除雜細(xì)胞，通過(guò)成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物（如波形蛋白Vimentin、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA）及TK基因缺失驗(yàn)證，確保細(xì)胞純度≥98%，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌污染，細(xì)胞活性≥90%。該細(xì)胞適配常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)條件，可穩(wěn)定傳代，生物學(xué)特性穩(wěn)定，保留其貼壁生長(zhǎng)、增殖活躍及TK基因缺陷的核心特征，廣泛應(yīng)用于腫瘤自sha基因治療研究、TK相關(guān)藥物篩選、細(xì)胞增殖與凋亡調(diào)控研究及病毒感染實(shí)驗(yàn)等科研場(chǎng)景，依托C3H/An小鼠的遺傳特性，同時(shí)適配腫瘤學(xué)、生理學(xué)相關(guān)研究，為腫瘤學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的科研探索、藥物研發(fā)提供核心細(xì)胞模型，適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實(shí)驗(yàn)室及各級(jí)醫(yī)院科研部門(mén)。

分離與培養(yǎng)原理

該細(xì)胞的分離與培養(yǎng)核心基于結(jié)締組織消化分離、永生化及基因編輯技術(shù)，結(jié)合C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的生物學(xué)特性及TK基因缺陷特征，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的精準(zhǔn)分離與體外穩(wěn)定培養(yǎng)，具體核心步驟分為分離、基因編輯和培養(yǎng)三部分：一是細(xì)胞分離原理，選取健康C3H/An小鼠，無(wú)菌操作下取出結(jié)締組織，去除血管、神經(jīng)等雜組織，碎至1mm3大小的組織塊，加入0.25%yi蛋白酶-EDTA消化液，37℃水浴消化30-40分鐘，期間每5-10分鐘搖動(dòng)一次，消化完成后加入含胎牛血清的培養(yǎng)基終止消化，用Hanks液漂洗2-3次，800r/min離心5分鐘棄去上清液，通過(guò)差速貼壁法去除雜細(xì)胞，獲得高純度原代結(jié)締組織細(xì)胞；二是基因編輯原理，采用CRISPR-Cas9等成熟基因編輯技術(shù)，定向敲除原代細(xì)胞中的TK基因，經(jīng)抗性篩選、Western Blot、Real-time PCR等方法驗(yàn)證，確保TK基因穩(wěn)定缺失，獲得L929-TK-細(xì)胞株，TK基因主要參與細(xì)胞增殖和分化過(guò)程，其缺失可使細(xì)胞對(duì)特定藥物產(chǎn)生特異性敏感性；三是細(xì)胞培養(yǎng)原理，將構(gòu)建獲得的該細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，添加青mei素、鏈mei素雙抗，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基可維持細(xì)胞的正常增殖活力，同時(shí)保留其貼壁生長(zhǎng)及TK基因缺陷特性，定期更換培養(yǎng)基（每2-3天一次），待細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代，確保細(xì)胞正常生長(zhǎng)，避免細(xì)胞老化或凋亡。此外，所有分離培養(yǎng)的該細(xì)胞均需經(jīng)過(guò)細(xì)胞活性檢測(cè)、純度鑒定、TK基因缺失驗(yàn)證及污染檢測(cè)，確保細(xì)胞的穩(wěn)定性和可靠性，為后續(xù)科研實(shí)驗(yàn)提供優(yōu)質(zhì)細(xì)胞模型，同時(shí)可通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)體系，模擬體內(nèi)結(jié)締組織微環(huán)境，提升細(xì)胞體外培養(yǎng)的穩(wěn)定性。

產(chǎn)品特點(diǎn)

該細(xì)胞以“純度高、活性強(qiáng)、特征明確、適配性廣"為核心，貼合TK基因相關(guān)研究及C3H/An小鼠遺傳背景相關(guān)科研需求，核心特點(diǎn)突出，匹配科研實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞模型的核心訴求。一是遺傳背景均一，源自近交系C3H/An小鼠，基因純合度高，個(gè)體差異小，可顯著提升實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性與可比性，同時(shí)繼承該品系補(bǔ)體活性高、對(duì)狂犬病毒敏感等特性，適配多領(lǐng)域研究；二是細(xì)胞純度高、無(wú)污染，細(xì)胞純度≥98%，經(jīng)成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物鑒定及嚴(yán)格污染檢測(cè)，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及雜細(xì)胞污染，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性；三是核心特征明確，TK基因穩(wěn)定缺失，對(duì)胸苷激酶相關(guān)藥物（如GCV）具有特異性敏感性，可精準(zhǔn)用于腫瘤自sha基因治療及藥物篩選相關(guān)實(shí)驗(yàn)，同時(shí)可作為T(mén)K基因功能研究的對(duì)照模型；四是生物學(xué)特性穩(wěn)定，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，貼壁性強(qiáng)、增殖迅速，可穩(wěn)定傳代30代以上，傳代過(guò)程中TK基因缺失特性不丟失，貼壁生長(zhǎng)表型穩(wěn)定，符合科研實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)可重復(fù)性的核心要求；五是適配性強(qiáng)，可適配體外常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、MTT增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Western blotting檢測(cè)、免疫熒光染色、基因轉(zhuǎn)染、藥物敏感性實(shí)驗(yàn)等多種實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景，同時(shí)可用于裸鼠體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)，助力體內(nèi)外協(xié)同研究，還可被TGF-β1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，適配纖維化相關(guān)研究；六是操作便捷，提供完整的細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、凍存說(shuō)明書(shū)，細(xì)胞復(fù)蘇成活率高（≥90%），無(wú)需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備，常規(guī)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)條件即可滿足生長(zhǎng)需求，適配各類(lèi)實(shí)驗(yàn)室操作，同時(shí)提供TK基因缺失驗(yàn)證、細(xì)胞培養(yǎng)等專屬技術(shù)指導(dǎo)。

適用實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景

該細(xì)胞專為T(mén)K基因相關(guān)、腫liu治療及結(jié)締組織相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，適配多種體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景，核心應(yīng)用包括：一是TK基因功能研究，利用該細(xì)胞TK基因缺失的特性，探究TK基因在細(xì)胞增殖、分化及腫瘤發(fā)生中的作用，明確其作為細(xì)胞異常增殖標(biāo)記物的相關(guān)功能，為基因功能研究提供支撐；二是腫瘤自sha基因治療研究，將該細(xì)胞作為模型，探究TK基因介導(dǎo)的自sha基因治療方案，評(píng)估GCV等藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果，為腫瘤基因治療技術(shù)研發(fā)提供依據(jù)；三是藥物篩選與藥效評(píng)估，將該細(xì)胞用于TK相關(guān)靶向藥物、hua療藥物、抗炎藥物及抗纖維化藥物的篩選，評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移的影響，同時(shí)可用于評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用，為藥物研發(fā)提供可靠的篩選模型；四是細(xì)胞增殖與凋亡調(diào)控研究，利用該細(xì)胞探究不同因素對(duì)結(jié)締組織細(xì)胞增殖、凋亡的調(diào)控機(jī)制，分析相關(guān)信號(hào)通路的作用，為結(jié)締組織疾病研究提供支撐；五是病毒感染相關(guān)研究，依托C3H/An小鼠對(duì)狂犬病毒敏感的特性，將該細(xì)胞用于病毒感染機(jī)制研究及抗病du藥物篩選；六是分子機(jī)制驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，可用于Western blotting、Real-time PCR、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證TK基因相關(guān)信號(hào)通路及成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化相關(guān)分子的調(diào)控機(jī)制，為相關(guān)研究提供分子層面的數(shù)據(jù)支撐。該細(xì)胞適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實(shí)驗(yàn)室及各級(jí)醫(yī)院科研部門(mén)，助力相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)的順利開(kāi)展。

備注：（具體細(xì)胞分離、培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作方法請(qǐng)參考產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）

儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)

儲(chǔ)存方面，該細(xì)胞凍存狀態(tài)下需置于-80℃超低溫冰箱或液氮中保存，有效期為12個(gè)月，凍存時(shí)需使用含5-10%DMSO的配套凍存液，采用梯度降溫法凍存（-1~-2℃/min降溫至-25℃以下，再以-5~-10℃/min降溫至-100℃后浸入液氮），避免細(xì)胞損傷；復(fù)蘇時(shí)需快速解凍（37℃水浴1-2分鐘），解凍后立即用70%酒精消毒凍存管，避免進(jìn)水污染，復(fù)蘇后需立即接種至培養(yǎng)瓶，加入預(yù)熱的專用培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，復(fù)蘇后24小時(shí)內(nèi)避免更換培養(yǎng)基，確保細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境、穩(wěn)定貼壁；常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下，細(xì)胞需置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中，使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基（每2-3天一次），待細(xì)胞融合度達(dá)80%-90%時(shí)傳代，避免細(xì)胞過(guò)度融合導(dǎo)致老化。注意事項(xiàng)包括：產(chǎn)品僅供科研使用，不用于臨床治療診斷；細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需快速解凍，避免反復(fù)凍融，解凍后及時(shí)接種，防止細(xì)胞活力下降，凍存管取出時(shí)需注意防護(hù)，避免凍傷；培養(yǎng)過(guò)程中需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則，禁止共用培養(yǎng)耗材，避免細(xì)胞污染，若發(fā)生污染切勿進(jìn)行半量換液，無(wú)菌操作是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵；細(xì)胞傳代時(shí)需控制消化時(shí)間（3-5分鐘），避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞貼壁能力下降，傳代比例建議為1:3-1:5，確保細(xì)胞生長(zhǎng)密度適宜；檢測(cè)過(guò)程中（如Western blotting、流式細(xì)胞術(shù)），需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，確保TK基因缺失及相關(guān)分子檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確；過(guò)期細(xì)胞及污染細(xì)胞嚴(yán)禁使用，詳細(xì)安全信息請(qǐng)參照產(chǎn)品SDS文件；運(yùn)輸過(guò)程中需采用干冰運(yùn)輸，避免高溫、劇烈震蕩，確保細(xì)胞活力，運(yùn)輸后需及時(shí)復(fù)蘇或轉(zhuǎn)移至對(duì)應(yīng)儲(chǔ)存環(huán)境。